Videók

TRANSRAT
Project

GCaMP2 zöld fluoreszcens kalcium indikátorfehérjét kifejező humán embrionális őssejtek (HUES9 sejtvonal) vizsgálata

2HUES9 FLUO 60X ALAP TRY TRY IONO EGTA.

Konfokális mikroszkópos felvétel (60x nagyítás): a GCaMP2 zöld fluoreszcens kalcium indikátorfehérjét kifejező humán embrionális őssejtek (HUES9 sejtvonal) vizsgálata. A sejtek endogén kalciumszintje eredendően különbözik, ezért különböző intenzitással láthatók bennük a fluoreszcens jel; a belső kalcium-hullámokat jól követi az indikátorfehérje jelének a „vibrálása”. Adott idő után a tenyészethez ionomycint adunk, amely felszabadítja a sejtek kalciumraktárait, így a fluoreszcens jel is hirtelen nagyon erős lesz, majd ismét lecsökken az intenzitása. A kísérlet végén EGTA oldatot adunk a tenyészethez, amely a sejtekbe behatolva megköti a kalciumot, így a fluoreszcencia lecsökken, majd eltűnik. Az EGTA „mellékhatása”, hogy a sejtek lassan elvesztik a kapcsolataikat egymással, ill. a tenyésztőedény falával is, így a felvételen úgy tűnik, mintha összezsugorodnának.

Ugyanaz még egyszer, lassítva.

CaMP2 zöld fluoreszcens kalcium indikátorfehérjét kifejező humán embrionális őssejtek (HUES9 sejtvonal) vizsgálata

6 HUES FLUO 60X CLIP-CA ATP PCA IONO EGTa

Konfokális mikroszkópos felvétel (60x nagyítás): a GCaMP2 zöld fluoreszcens kalcium indikátorfehérjét kifejező humán embrionális őssejtek (HUES9 sejtvonal) vizsgálata. A kísérlet kezdetén a sejtekben alacsony szintű a belső kalcium koncentráció, de nem egyforma: ezt mutatja a fluoreszcencia intenzitás különbsége különböző sejtek között. A kísérlet során először ATP, majd PCA adagolásával lehet a receptor közvetített endogén kalciumszintet emelni, ilyenkor a fluoreszcencia intenzitás megnő (a sejtek „ felvillannak”). Ezt követi egy nagyon erőteljesn fluoreszcencia intenzitás növekedés: ezt ionomycin adagolásával érjük el, amely felszabadítja a sejtek kalciumraktárait, így a fluoreszcens jel is hirtelen nagyon erős lesz, majd ismét lecsökken az intenzitása. A kísérlet végén EGTA oldatot adunk a tenyészethez, amely a sejtekbe behatolva megköti a kalciumot, így a fluoreszcencia lecsökken, majd eltűnik („kioltás”).

Ugyanaz még egyszer, ezúttal lassítva.

GCaMP2 zöld fluoreszcens kalcium indikátorfehérjét kifejező sejtek vizsgálata

60×

Konfokális mikroszkópos felvétel (60x nagyítás): a GCaMP2 zöld fluoreszcens kalcium indikátorfehérjét kifejező sejtek vizsgálata. Ionomycin által kiváltott endogén kalcium felszabadulás, ill. a keletkező „kalcium-hullámok” követése a fluoreszcens indikátorfehérjével.

GCaMP2 zöld fluoreszcens kalcium indikátorfehérjét kifejező sejtek vizsgálata

80×

Konfokális mikroszkópos felvétel (80x nagyítás): a GCaMP2 zöld fluoreszcens kalcium indikátorfehérjét kifejező sejtek vizsgálata. Ionomycin által kiváltott endogén kalcium felszabadulás követése a fluoreszcens indikátorfehérjével.

GCaMP2 zöld fluoreszcens kalcium indikátorfehérjét kifejező sejtek vizsgálata | 40×

Konfokális mikroszkópos felvétel (40x nagyítás): a GCaMP2 zöld fluoreszcens kalcium indikátorfehérjét kifejező humán embrionális őssejtekből (HUES9 sejtvonalból) differenciáltatott szívizomsejtek vizsgálata. Jól megfigyelhető, hogy a spontán összehúzódásokat a sejteken belüli „kalcium-hullámok” kísérik, amelyek jól követhetők az erre érzékeny indikátorfehérje fluoreszcenciájának a változásaival. 

GCaMP2 zöld fluoreszcens kalcium indikátorfehérjét kifejező humán embrionális őssejtekből (HUES9 sejtvonalból) differenciáltatott szívizomsejtek vizsgálata

80×

Konfokális mikroszkópos felvétel (80x nagyítás): a GCaMP2 zöld fluoreszcens kalcium indikátorfehérjét kifejező humán embrionális őssejtekből (HUES9 sejtvonalból) differenciáltatott szívizomsejtek vizsgálata. Jól megfigyelhető, hogy a spontán összehúzódásokat a sejteken belüli „kalcium-hullámok” kísérik, amelyek jól követhetők az erre érzékeny indikátorfehérje fluoreszcenciájának a változásaival.

GCaMP2 zöld fluoreszcens kalcium indikátorfehérjét kifejező humán embrionális őssejtekből (HUES9 sejtvonalból) differenciáltatott szívizomsejtek vizsgálata

80×

Konfokális mikroszkópos felvétel (80x nagyítás): a GCaMP2 zöld fluoreszcens kalcium indikátorfehérjét kifejező humán embrionális őssejtekből (HUES9 sejtvonalból) differenciáltatott szívizomsejtek vizsgálata. Jól megfigyelhető, hogy a spontán összehúzódásokat a sejteken belüli „kalcium-hullámok” kísérik, amelyek jól követhetők az erre érzékeny indikátorfehérje fluoreszcenciájának a változásaival.

További információ: Dr. Orbán Tamás | orbant biomembrane p hu